固相萃取法用于茶葉中有機雜環類農藥殘留量的測定

 1 前言 茶葉是一種天然的保健飲料藥物，具有*的香氣，口感以及抗癌，延緩衰老等藥用和 保健功效。飲茶有利于健康，然而茶葉的質量安全，特別是茶葉中農藥污染的問題，一直影 響著茶葉的健康消費。茶葉基質復雜，要檢測的殘余農藥種類多，性質差異大，直接通過儀 器時不能達到檢驗，需要經過精細的樣品前處理過程進行分離富集。因此測定茶葉 中的農藥殘留不僅需要高靈敏的痕量檢測技術，還需要高效快速的樣品前處理技術。

2 儀器與試劑

2.1 儀器 SPE400 全自動機械臂固相萃取儀；氣相色譜-質譜聯用儀；粉碎機；離心機；氮吹儀

2.2 試劑及耗材 丙酮；正己烷；氯化鈉；無水硫酸鈉；活性炭固相萃取小柱，3ml，填充物 250mg；中性 氧化鋁固相萃取小柱，3ml，填充物 250mg 丙酮-正己烷（1+3）溶液：取 100 mL 丙酮，加入 300 mL 正己烷，搖勻備用； 丙酮-正己烷（2+1）溶液：取 200 mL 丙酮，加入 100 mL 正己烷，搖勻備用。

3 實驗方法

3.1 實驗步驟 SPE-01-2019 07 2

3.1.1 取樣 茶葉樣品經過粉碎后通過孔徑為 0.84mm 篩，混勻。

3.1.2 提取 稱取 1g 均勻試樣于 10mL 離心管中，加入 1g 氯化鈉，加入 2mL 蒸餾水，于混勻器 上混勻 30s，放置 30min，再加入 4mL 丙酮和正已烷混合液，在混合器上混勻 2min。在 2500 r/min 下離心 1min，吸取上層正己烷提取液于另一 15mL 刻度試管中。再分別加入 2mL 丙酮 和正己烷混合液重復提取兩次，合并提取液，加入 1g 無水硫酸鈉干燥。將干燥后的提取液完 全轉移至樣品管中，后在氮吹儀上 50℃下氮吹至約 1mL，待凈化。 （加入 Nacl 后） （加入蒸餾水后） SPE-01-2019 07 3 （離心前） （離心后） （氮吹前） （氮吹后）

3.1.3 固相萃取儀器設定 過程 試劑名稱 用量 速度 等待時間 空氣助推 次數 活化 丙酮 1mL 0.5mL/min 0s 1mL 3 正己烷 1mL 0.5mL/min 0s 1mL 3 上樣 1mL 2mL/min 0s 2mL 2 潤洗上樣 正己烷 1mL 60mL/min 0s 2mL 2 洗脫 丙酮+正己烷（2+1） 6mL 3mL/min 5s 2mL 1 SPE-01-2019 07 4 將收集的洗脫液置于 50℃下氮氣流吹至近干。后用正己烷定容于 0.5 mL，供色譜分 析備用。 3.1.4 色譜測定條件 色譜柱：石英毛細管柱，5%苯基甲基聚硅氧烷固定相。30m*0.2mm（內徑），膜厚 0.2 5um，或相當者； 色譜柱溫度：70℃保持 2min，以 8℃/min 上升至 180℃，再以 3℃/min 上升至 280℃，保 持 18min； 進樣口溫度：250℃； 色譜-質譜接口溫度：220℃； 載氣：氦氣（純度＞99.995%），0.6mL/min； 進樣量：1uL； 進樣方式：無分流進樣，1min 后開閥； 電離方式：EI； 電離能量：70ev； 測定方式：選擇離子監測方式； 監測離子（m/z）：見下表； 溶劑延遲：15min。 9 種雜環類農藥的監測離子 農藥 采集時間/min 監測離子（m/z） 莠去津 15~20 173,187,200 a）,215 乙烯利核利 20~25 187,198,212 a),285 SPE-01-2019 07 5 腐霉利 25~26.5 96 a),255,283,285 氟菌唑 25~26.5 219,248,278 a),287 抑霉唑 26.5~28.2 173 a),215,240,296 噻嗪酮 28.2~30.5 105 a),172,175,305 丙環唑 30.5~36 173 a),191,259,261 氯苯嘧啶醇 36~40.5 139 a),219,251,330 噠螨靈 40.5~43 117,147 a),309,364 a)標記離子為定量離子

3.1.5 色譜測定 根據樣液中莠去津、乙烯菌核利、 腐霉利、氟菌唑、抑霉唑、噻嗪酮、丙環唑、氯苯 嘧啶醇、噠螨靈的含量情況，選定峰面積相近的標準工作溶液。標準工作溶液和樣液中莠去 津、乙烯菌核利、 腐霉利、氟菌唑、抑霉唑、噻嗪酮、丙環唑、氯苯嘧啶醇、噠螨靈的響應 值均應在儀器檢測的線性范圍內。對標準工作液的樣液等體積參插進樣測定。

3.1.6 質譜確證 對標準溶液及樣液進行測定，如果樣液中與標準溶液相同的保留時間有峰出現，則對其 進行質譜確證。當待測物全部監測離子的相對豐度與標準品一致，且相似度正負 10%之內時， 可確證此待測物。在上述氣相色譜-質譜條件下，9 種雜環類農藥的保留時間及監測離子豐度 比（m/z)見下表。 SPE-01-2019 07 6 9 種雜環類農藥的保留時間和監測離子豐度比 農藥 保留時間/min 監測離子豐度比 莠去津 18.14 173：187：200：215（26:3:100:58） 乙烯利核利 21.09 187：198：212：285（74:89:100:86） 腐霉利 25.46 96：255：283：285（100:8:69:5） 氟菌唑 25.67 219：248：278：287（18:7:100:53） 抑霉唑 27.33 173：215：240：296（76:100:9:6） 噻嗪酮 28.30 105：172：175：305（100:35:25:6） 丙環唑 32.20,32.58 173：191：259：261（100:27:88:57） 氯苯嘧啶醇 39.12 139：219：251：330（100:63:54:36） 噠螨靈 41.64 117：147：309：364（15:100:7:6）

4 結果與討論

4.1 實驗過程為 A/B 串柱類型，經過活性炭固相萃取 A 柱的樣品溶液上樣后直接收集，收集 液再過中性氧化鋁固相萃取 B 柱，用潤洗液對收集管潤洗兩次后一起過 B 柱，后將目標物 從 B 柱洗脫。

4.2 活化過程中的 0.5mL/min 的流速為國標中明確要求，上樣和洗脫過程流速應當適當慢一 些，以使目標物盡量保留在柱內以及后可以洗脫。

4.3 因活化過程流速很慢，為整個實驗過程的處理速度故此階段空氣助推設置的盡量小。 借助儀器默認空氣助推值溶劑推出。

4.4 結論 SPE-01-2019 07 7 用固相萃取法凈化茶葉中有機雜環殘留量的凈化過程實現自動化處理，減少人力的消耗， 實驗過程中使用的有機溶劑采用密封處理，降低了對人體的傷害且儀器能的控制活化、 上樣、洗脫等溶劑流速，使樣品凈化的更為充分。

注意事項 樣品加入蒸餾水混勻后會出現嚴重掛壁情況，之后加丙酮正己烷時需盡量將其沖下，殘 留的可以通過離心將其混勻。離心并干燥后的提取液轉移至樣品管后，需用適量正己烷潤洗 離心管，將上層潤洗液一并倒進樣品管后氮吹濃縮。